Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的操作过程中逐渐扩展

从第一次用到人锥体内自身免疫到用到1同型肝炎医学疼痛的方面率在青少年中后期就有很好的揭示，多个人锥体内自身免疫感染性的青少年中都有70%在血浆转成后10周内入院肝炎，而随访15年的青少年这一人口比例缩减到84%。来得之下，占医学1同型肝炎一半以上的同型1同型肝炎的发作机制还不会想得到更好的深入研究。

越来越多的人开始使用应于系统来定义1同型肝炎的方面：群锥体在用到多种人锥体内自身免疫时转入第1阶段，用到血糖持续性时转入第2阶段，用到疼痛时转入第3阶段。一些多发人锥体内自身免疫感染性的群锥体，在1期和2期，方面较慢，并发展为发作的1同型肝炎。我们此前揭示了一第三组在首次侦测到多种人锥体内自身免疫检验后至少10年无肝炎的极慢方面者，这第三组患儿伤亡人数少，但相似性非常恰当。随后，我们发现人锥体内自身肝细胞酪氨酸CD8+T细胞核反应会在方面快速的患儿中都基本不发挥作用，但在近期发作和值得注意的肝炎患儿中都很容易侦测到。这可能表明，与方面患儿来得，这些患儿自身病原锥体的调节消散。

早期深入研究表明，尽管调节性T细胞核(Treg)需求量正常，但肝炎患儿发挥作用一些特性缺陷，其中都之外对IL-2的反应会灵活性降低。此外，肝炎患儿中都的畸变CD4+T细胞核可能对调节越来越具抵抗性，表现为畸变T细胞核的诱导消散，大自然归因于的Treg和锥体外归因于的诱导Treg，以及肝细胞年中的CD4+T细胞核中都IL-2反应会消散。本深入研究的旨在是揭示了CD4+调节性T细胞核(Treg)在群集极快速方面者中都的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX深入研究是一项以老年人系统化的纵向深入研究，在21岁不限确诊的患儿亲属中都检查1同型肝炎的可怕因素。我们此前揭示了长期快速方面者的相似性，他们保持稳定多重人锥体内自身免疫感染性高达10年，但不会用到肝炎的医学疼痛，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名在此期间保持稳定无肝炎并主动提供大量血液检验的快速方面者纳入T和B细胞核特性系统性。在目前为止的深入研究中都，8名慢方面者(SP第三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的人锥体内自身免疫感染性。所有的自发性都处于1同型肝炎方面的1期，尽管一些人随后无法控制了人锥体内自身免疫对某些肝细胞的感染性反应会，然而，一名患儿之前处于2期至少6年，但不会用到医学疼痛，一名患儿被诊断为肝炎，该受试者72岁，在搜集实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中都对该酪氨酸顺利进行了单独检查和。复合外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核术和T细胞核诱导试验检查和酪氨酸中都Treg的基频、表同型和特性。使用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)顺利进行无行政官员聚类系统性，检查和Treg表同型。

结果：与身锥体健康酪氨酸来得，来自慢方面锥体的知觉CD4+T细胞核的行政官员聚类辨识，作用于的知觉CD4+ Treg基频缩减，与免疫抑制诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c升高的患儿与方面快速者和意味着的对照第三组来得，Treg谱有所多种不同。特性系统性表明，与身锥体健康酪氨酸来得，来自快速方面锥体的Treg介导的CD4+畸变T细胞核诱导值得注意受损。表现为对畸变CD4+T细胞核CD25和CD134传达的诱导缩减。

上图1 深入的表同型系统性辨识，CD4+Treg亚同型在慢方面函数调用中都缩减。由FlowSOM填充的Treg三楼，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物传达断定不止10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)使用9个多种不同Treg标上填充的10个元簇的MST。每个终端值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，越来越大的元坦克部队(10个元坦克部队)在终端第三组周围手工。每个终端中都的饼上图说明单个标上的传达层次。(b)每个元聚类的热上图，以辨识整锥体标上传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充上图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对原子量为每个metacluster木箱两条路线上图(原子量> 0.05%)未确定为HD和SP第三组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。深蓝色左上角值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检查和。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 使用CITRUS的预测模同型表明，Treg基频的缩减是方面快速的标志。分级相关联(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP自发性和意味着的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞核上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的值得一提的是性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行复合，三维FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)第三组以及酪氨酸SP 606(深蓝色)中都CD25+ cd127的基频简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联偏序的木箱两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值著色，箭头突不止的簇被标识为SP和HD函数调用两者之间的多种不同。(j)木箱两条路线上图辨识了在SP(黑斑)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对原子量(人口比例)。(k)直方上图辨识每个簇的表同型(粉红色)和Treg标上相对传达与文化背景传达(红色);上列，闪存Treg_3;下面四人，闪存Treg_4。文化背景与所有其他簇中都标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检查和

上图3 与身锥体健康献血者来得，方面快速者知觉treg的GITR缩减。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标上的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热上图(sp606不之外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中都所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，辨识直方上图(c)和简介上图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检查和，p< 0.07(深蓝色)所有酪氨酸之外，p< 0.05(红色)酪氨酸SP 606和意味着的HD不之外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从分级相关联，从所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)串联，辨识直方上图(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检查和

上图4 来自快速方面的CD4+ treg细胞核控制畸变CD4+T细胞核的灵活性降低。SP第三组用红色的两条路线和左上角说明，HD第三组用紫色的两条路线和左上角说明，深蓝色的两条路线/左上角说明酪氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被标上为CFSE, Treg按辨别的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核，培养不止来3当晚顺利进行流式细胞核术侦测。(a-d)与CD4+应答者相对应的treg培养不止来(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养不止来。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。使用感染性对照(作用于的响应细胞核下同treg)计算诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 畸变CD4+T细胞核对快速方面的T细胞核酪氨酸的诱导越来越敏感。SP第三组用红色的两条路线和左上角说明，HD第三组用紫色的两条路线和左上角说明，深蓝色的两条路线/左上角说明酪氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标上，treg按辨别的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核，培养不止来3当晚顺利进行流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养不止来。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE诱导百份(b)。(c,d) CD25诱导百份(c)和CD134诱导百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大不止来中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得不止的假设是，来自快速方面子的酪氨酸知觉CD4+Treg在GITR传达中都想得到了扩张和多样化，强调了进一步深入研究Treg在1同型肝炎不未确定性群锥体中都的异质性的有效性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28